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布氏桿菌病酶聯(lián)免疫吸附試驗
更新時間:2011-12-14   點擊次數(shù):1294次

(1)間接ELISA(1ELISA)
我國現(xiàn)已建立了間接ELISA方法,但目前應(yīng)用還較少。間接ELISA試驗中,多是以光滑型脂多糖(sLPS)作為抗原的,這些方法大多已通過田間試驗并得到了驗證,并正在被廣泛應(yīng)用。lELISA高度敏感,但不能鑒別牛種布氏桿菌19號疫苗接種所產(chǎn)生的抗體。不同的間接ELISA試驗程序都比較相似,脂多糖抗原包被ELISA板,PBST洗滌后加入待檢血清,再依次加入酶標(biāo)二抗、底物和終止液,用酶標(biāo)儀測光密度值并判定結(jié)果。ELISA常用反應(yīng)率來判定結(jié)果,即樣品OD值/陽性對照OD值×100%。

間接ELISA在檢測感染牛時其敏感性等于或大于BBAT,在檢測未免疫的牛時其特異性與CFT相同。根據(jù)所設(shè)定的臨界值不同,在檢測免疫牛時其特異性可能會低于CFT。

(2)競爭ELISA
我國目前還未見有布氏桿菌病競爭ELISA試驗的報道。該方法應(yīng)用了單克隆抗體,其特異性明顯高于間接ELISA。競爭ELISA可以排除牛種布氏桿菌19號疫苗所產(chǎn)生抗體的影響。其試驗程序首先為包被脂多糖抗原,PBST洗滌后加入單克隆抗體(M84),再立即加入待檢血清,溫育后再加入酶標(biāo)羊抗鼠IgG,然后依次加入底物和終止液,用酶標(biāo)儀測光密度值并判定結(jié)果。其結(jié)果常采用反應(yīng)率來判定。

競爭ELISA在檢測感染牛時其敏感性等于或大于凝集試驗,與間接ELISA相當(dāng)。在檢測未免疫牛時,其特異性等于或大于CFT和間接ELISA。在檢測牛種布氏桿菌”號近期免疫牛時,其特異性會低一些.但在檢測過往免疫動物時,其特異性要顯著升高。

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