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操作ELISA試劑盒組份和過程
更新時(shí)間:2019-10-09   點(diǎn)擊次數(shù):1773次

ELISA中有三個(gè)必要的試劑:免疫吸附劑、結(jié)合物和酶的底物等

完好的ELISA試劑盒包含以下各組分:

1.已包被抗原或抗體的固相載體(免疫吸附劑)

2.酶符號的抗原或抗體(結(jié)合物);

3.酶的底物;

4.陰性對照品和陽性對照品(定性測定中),參考規(guī)范品和控制血清(定量測定中);

5.結(jié)合物及標(biāo)本的稀釋液;

6.洗刷液

7.酶反響停止液。


ELISA試劑盒操作過程:

1. 加規(guī)范品:在酶標(biāo)包被板上設(shè)規(guī)范品孔,依次參加不同濃度的規(guī)范品50ul(主張每個(gè)濃度做2個(gè)平行孔)

2. 加樣:分別設(shè)空白孔(空白對照孔不加樣品及酶標(biāo)試劑,其他各步操作相同)、待測樣品孔。在酶標(biāo)包被板上待測樣品孔中先加樣品40μl,然后再加樣品親和素10μl。加樣將樣品加于酶標(biāo)板孔底部,盡量不觸及孔壁,悄悄晃動混勻。

3. 溫育:用封板膜封板后置37℃溫育30分鐘。

4. 配液:將30倍濃縮洗刷液用蒸餾水30倍稀釋后備用。

5. 洗刷:小心揭掉封板膜,棄去液體,甩干,每孔加滿洗刷液,靜置30秒后棄去,如此重復(fù)5次,拍干。

6. 加酶:除空白孔外每孔參加酶標(biāo)試劑50μl。

7. 溫育:操作同3。

8. 洗刷:操作同5。

9. 顯色:ELISA試劑盒每孔先參加顯色劑A50μl,再參加顯色劑B50μl,悄悄震蕩混勻,37℃避光顯色15分鐘.

10. 停止:每孔加停止液50μl,停止反響(此刻藍(lán)色立轉(zhuǎn))。
11. 測定:以空白空調(diào)零,450nm波長依序丈量各孔的吸光度(OD值)。 測定應(yīng)在加停止液后15分鐘以內(nèi)進(jìn)行。

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